浙江大学肿瘤类器官研习班学员实验报告
实验目的
掌握无菌操作技能，熟悉三维培养肿瘤类器官技术流程。
实验内容
1.不同来源样本的处理；
2.非小细胞肺癌酶解单细胞的获得；
3.非小细胞肺癌3D铺板过程及注意事项。
实验材料及试剂
器材：-20℃预冷冰盒，-80℃预冷枪头、96孔低吸附板、移液器、离心机、倒置显微镜、CO2培养箱、生物安全柜、离心管、试管架等。
试剂：组织保存液、组织酶解液、基质胶、非小细胞肺癌类器官培养试剂盒。
实验结果
此次培训中，未出现细胞污染等异常状况，细胞克隆形成率高、增殖速率快、生长状态良好。下图为编号B2的培养孔中非小细胞肺癌类器官的明场照片。
问题汇总
01.问题：有些培养孔中出现了种板不均匀的情况，克隆呈不均匀分别，有些集中聚集在孔内中央区域，这样会导致局部生长过密，基质胶不足以支撑过多细胞生长而导致的细胞状态变差，细胞传代时间缩短，代次增加。
解决方案：再铺板前应用枪头充分混匀，在铺板后matrigel凝固前，应用手动十字法摇匀。
02.问题：实验操作中出现试剂打翻的状况；另外普遍存在培养板开盖后盖子乱摆放，完成阶段性操作不盖盖子的情况，增加了细胞污染的风险。
解决方案：加强无菌操作意识，养成良好的实验操作习惯，能够在实验操作中技术判断出细胞污染的状况。
细胞培养中常见的污染状况展示：
