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肿瘤类器官技术专题研习班问题解答

科途医学联合浙江大学举办的肿瘤类器官技术专题研习班已经圆满结束，针对大家较为关心的问题，科小途认真总结了一下，为大家解答。

样本处理的相关问题


★ 科小途答疑 ★

Q
1
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哪些样本污染率较高？如何预防取样及运输中的污染？

科小途：胃肠道及生殖道肿瘤样本属于污染率较高样本。推荐使用含有抗生素的完全培养基保存样本后运输。收到样本后，选择性的剥离外层组织，使用含有抗生素的组织清洗液漂洗3次，清除组织样本表面可能存在的污染物。

Q
2
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胸腹水样本处理时，离心时间、转速及升降速度分别是多少？

科小途：胸腹水样本第一次离心建议选择350g，10min。在之后的离心过程中，为确保细胞活率，建议选择300g，3min。离心时降速建议选择不要超过3，太高的降速会导致细胞重新悬起，离心不充分。


肿瘤类器官建模相关问题


★ 科小途答疑 ★

Q
1
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2D培养细胞的常规计数方式适用于3D类器官吗？

科小途：不适用。2D培养的细胞计数通常使用血球计数板和自动化的细胞计数仪，所计数的对象为单细胞。
3D类器官计数对象为小细胞团，先精确计数相关癌种特定直径的3D类器官细胞微球中细胞的数量，再直接在培养板中计数3D类器官细胞微球数量，最后公式计算细胞总数量：细胞总数量=单个微球中细胞数×微球数。

Q
2
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种板时推荐的种板细胞量和培养基体积为多少？

科小途：培养基终体积=凝胶前加入培养基体积+凝胶后补液体积。推荐的种板细胞量和培养基体积见下表。

培养器皿

整板细胞量

凝胶前培养基体积

凝胶后补液体积

培养期间补液体积

96 孔培养板

105

75ul

25ul

25ul

24 孔培养板

5×105

300ul

200ul

200ul

1

传代冻存相关问题


★ 科小途答疑 ★

Q
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类器官传代及终止消化的节点怎么判断？

科小途：培养7-14天或镜检观察到单个类器官直径大于200-300um时可以进行传代，酶解消化时间为2-3min，建议消化终点以类器官酶解打散后呈3-10个细胞的小细胞团为宜。


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