K2 ONCOLOGY
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浙江大学肿瘤类器官研习班学员实验报告


实验目的


掌握无菌操作技能，熟悉三维培养肿瘤类器官技术流程。



实验内容


  1. 不同来源样本的处理；

  2. 非小细胞肺癌酶解单细胞的获得；

  3. 非小细胞肺癌3D铺板过程及注意事项。



实验材料及试剂


器材：-20℃预冷冰盒，-80℃预冷枪头、96孔低吸附板、移液器、离心机、倒置显微镜、CO2培养箱、生物安全柜、离心管、试管架等。

试剂：组织保存液、组织酶解液、基质胶、非小细胞肺癌类器官培养试剂盒。




实验结果


此次培训中，未出现细胞污染等异常状况，细胞克隆形成率高、增殖速率快、生长状态良好。下图为编号B2的培养孔中非小细胞肺癌类器官的明场照片。


B2第一天





B2第六天





问题汇总






01.

问题

有些培养孔中出现了种板不均匀的情况，克隆呈不均匀分别，有些集中聚集在孔内中央区域，这样会导致局部生长过密，基质胶不足以支撑过多细胞生长而导致的细胞状态变差，细胞传代时间缩短，代次增加。

铺板不均

解决方案：再铺板前应用枪头充分混匀，在铺板后matrigel凝固前，应用手动十字法摇匀。


实验操作中出现试剂打翻的状况；另外普遍存在培养板开盖后盖子乱摆放，完成阶段性操作不盖盖子的情况，增加了细胞污染风险。




02.问题


解决方案：加强无菌操作意识，养成良好的实验操作习惯，能够在实验操作中技术判断出细胞污染的状况。


细胞培养中常见的污染状况展示：

杆菌污染

球菌污染

细菌污染

支原体污染

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