EHSgel® Basement Membrane Matrix产品介绍
EHSgel® Basement Membrane Matrix
EHSgel® matrix基质胶是从富含细胞外基质蛋白的小鼠肉瘤Engelbreth-Holm-Swarm (EHS)中提取纯化制备的可溶基底膜基质。EHSgel®基质胶的主要成分是四种基底膜基质蛋白：Laminin, Collagen IV, Entactin/Nidogen 以及 Heparin sulfate proteoglycan，此外还包含如TGF-β1、IGF、FGF等多种细胞因子等（Growth Factor Reduced类产品去除了小分子量蛋白因子）。EHSgel® matrix基质胶在37℃自组装成超级分子结构，在物理特性、组成成分和功能特征方面与天然基底膜类似。
EHSgel® matrix基质胶为细胞培养提供更加接近生理条件的微环境，适用于类器官培养、干细胞维持和分化，血管生成，肿瘤浸润，体内疾病模型构建及再生医学等多种实验或研究领域。
EHSgel® Matrix的主要基底膜基质蛋白含量
基质胶的主要成分为Collagen IV，Laminin，Entactin/Nidogen和Heparin sulfate proteoglycan（Perlecan）。我们用特异性抗体建立ELISA检测方法。实验检测相同体积的MG和6个不同批次的EHSgel中4种主要组分相对定量，发现相同体积下，EHSgel的4种主要成分均显著高于MG。（图4）
EHSgel® Matrix 质量控制
蛋白浓度测定
总蛋白浓度采用改进的福林酚法（Modified Lowry Protein Assay）测定。
主要基底膜基质蛋白含量测定
Laminin, Collagen IV, Nidogen和Perlecan 的蛋白水平通过特异性抗体建立的ELISA方法相对定量。
基质金属蛋白酶MMP2 残留检测
基质金属蛋白酶MMP2通过特异性抗体的免疫印迹法检测（Western Blot Assay）。
蛋白电泳
批次样品均用SDS-PAGE分离并用考马斯亮蓝法染色。
成胶性测试
批次样品均在37℃孵育30分钟测试成胶性能，并在37℃培养基中维持14天，完成稳定性测试。
多种组织类器官培养测试
批次样品均测试了支持多种组织类器官培养的能力。
血管生成测试
批次样品均测试了支持人血管内皮细胞（HUVEC）体外血管生成的能力。
CDX体内成瘤性测试
在MDA-MB-231体内移植瘤模型（CDX）中，测试使用产品的CDX的成瘤率和瘤体生长曲线。
内毒素检测
内毒素水平使用LAL内毒素检测试剂盒检测。
无菌检测及鼠源病毒安全性
培养实验验证产品不存在细菌，真菌和支原体污染。PCR检测证明产品测试不包含LDEV/LDHV病毒。原料鼠均经过如下病原体的抗体检测（MAP法）：Ect, MHV, SV, PVM, Reo-3, MVM, LCMV, HV, TMEV, FL/MAD1, K87/MAD2, POLY, MPV, MCMV, MNV, EDIM, K virus, LDEV, MKPV. 瘤体经过如下病原体PCR检测：Mycoplasma spp, Helicobacter, LDEV, Sendai，MHV，PVM，MVM, Reo3, MRV, Ectro, LCM, K virus, MTV, Polyma, Hantan, Seoul, M.Ad, MCMV, Norovirus, TMEV, KRV, H-1, RCV.
EHSgel® Matrix 应用数据
使用Competitor C MG基质胶和EHSgel Matrix 进行平行建模及扩增培养测试，在两种细胞基质产品中进行类器官培养的对比照片。
体外血管生成检测 (In Vitro Angiogenesis Assay)
血管生成检测是一种在基质胶上的血管内皮细胞形成具有微血管结构的检测，用于评价促进或者抑制血管生成的影响因素。如果环境条件适合形成血管，血管内皮细胞会形成类似于血管的微管腔网格结构。EHSgel测试可以提供血管内皮细胞形成血管所需要的ECM支撑环境，在加入适当的培养基和生长因子（FGF,VEGF 等）可以形成微管腔网格结构。图A和B分别为HUVEC细胞在MG和EHSgel上，在30ng/ml FGF2的HUVEC完全培养基中培养3小时后采集的照片。图C和D为HUVEC细胞在MG和EHSgel上，在含有30ng/ml FGF2的完全培养基中培养5小时，用钙黏素染色后，在荧光显微镜下采集的照片。
移植瘤模型体内成瘤率测试 (In Vivo Tumorigenicity Test)
EHSgel可以显著增强肿瘤细胞或组织在原位或皮下移植瘤成瘤效果。本测试实验采用MDA-MB-231三阴性乳腺癌细胞进行皮下移植瘤成瘤率测试。MDA-MB-231细胞单独皮下移植的成瘤率低，但是细胞在混合基质胶注射移植后，可以明显提高该移植瘤的瘤体生长速度和成瘤率。在该检测中，1×106个MDA-MB-231细胞按1:1体积分别与MG，EHSgel 或PBS混合后，注射到BALB/c裸鼠皮下，测试30天内移植瘤的生长速度和成瘤率。测试表明，EHSgel组在成瘤率和生长速度方面，均与MG组相当，且两组均明显高于PBS对照组。（图12. A和C）。实验表明，EHSgel可以支持MDA-MB-231细胞体内成瘤。（图12，B和D）
EHSgel® Basement Membrane Matrix
EHSgel® matrix基质胶是从富含细胞外基质蛋白的小鼠肉瘤Engelbreth-Holm-Swarm (EHS)中提取纯化制备的可溶基底膜基质。EHSgel®基质胶的主要成分是四种基底膜基质蛋白：Laminin, Collagen IV, Entactin/Nidogen 以及 Heparin sulfate proteoglycan，此外还包含如TGF-β1、IGF、FGF等多种细胞因子等（Growth Factor Reduced类产品去除了小分子量蛋白因子）。EHSgel® matrix基质胶在37℃自组装成超级分子结构，在物理特性、组成成分和功能特征方面与天然基底膜类似。
EHSgel® matrix基质胶为细胞培养提供更加接近生理条件的微环境，适用于类器官培养、干细胞维持和分化，血管生成，肿瘤浸润，体内疾病模型构建及再生医学等多种实验或研究领域。
EHSgel® Matrix的主要基底膜基质蛋白含量
基质胶的主要成分为Collagen IV，Laminin，Entactin/Nidogen和Heparin sulfate proteoglycan（Perlecan）。我们用特异性抗体建立ELISA检测方法。实验检测相同体积的MG和6个不同批次的EHSgel中4种主要组分相对定量，发现相同体积下，EHSgel的4种主要成分均显著高于MG。（图4）
EHSgel® Matrix 质量控制
蛋白浓度测定
总蛋白浓度采用改进的福林酚法（Modified Lowry Protein Assay）测定。
主要基底膜基质蛋白含量测定
Laminin, Collagen IV, Nidogen和Perlecan 的蛋白水平通过特异性抗体建立的ELISA方法相对定量。
基质金属蛋白酶MMP2 残留检测
基质金属蛋白酶MMP2通过特异性抗体的免疫印迹法检测（Western Blot Assay）。
蛋白电泳
批次样品均用SDS-PAGE分离并用考马斯亮蓝法染色。
成胶性测试
批次样品均在37℃孵育30分钟测试成胶性能，并在37℃培养基中维持14天，完成稳定性测试。
多种组织类器官培养测试
批次样品均测试了支持多种组织类器官培养的能力。
血管生成测试
批次样品均测试了支持人血管内皮细胞（HUVEC）体外血管生成的能力。
CDX体内成瘤性测试
在MDA-MB-231体内移植瘤模型（CDX）中，测试使用产品的CDX的成瘤率和瘤体生长曲线。
内毒素检测
内毒素水平使用LAL内毒素检测试剂盒检测。
无菌检测及鼠源病毒安全性
培养实验验证产品不存在细菌，真菌和支原体污染。PCR检测证明产品测试不包含LDEV/LDHV病毒。原料鼠均经过如下病原体的抗体检测（MAP法）：Ect, MHV, SV, PVM, Reo-3, MVM, LCMV, HV, TMEV, FL/MAD1, K87/MAD2, POLY, MPV, MCMV, MNV, EDIM, K virus, LDEV, MKPV. 瘤体经过如下病原体PCR检测：Mycoplasma spp, Helicobacter, LDEV, Sendai，MHV，PVM，MVM, Reo3, MRV, Ectro, LCM, K virus, MTV, Polyma, Hantan, Seoul, M.Ad, MCMV, Norovirus, TMEV, KRV, H-1, RCV.
EHSgel® Matrix 应用数据
使用Competitor C MG基质胶和EHSgel Matrix 进行平行建模及扩增培养测试，在两种细胞基质产品中进行类器官培养的对比照片。
体外血管生成检测 (In Vitro Angiogenesis Assay)
血管生成检测是一种在基质胶上的血管内皮细胞形成具有微血管结构的检测，用于评价促进或者抑制血管生成的影响因素。如果环境条件适合形成血管，血管内皮细胞会形成类似于血管的微管腔网格结构。EHSgel测试可以提供血管内皮细胞形成血管所需要的ECM支撑环境，在加入适当的培养基和生长因子（FGF,VEGF 等）可以形成微管腔网格结构。图A和B分别为HUVEC细胞在MG和EHSgel上，在30ng/ml FGF2的HUVEC完全培养基中培养3小时后采集的照片。图C和D为HUVEC细胞在MG和EHSgel上，在含有30ng/ml FGF2的完全培养基中培养5小时，用钙黏素染色后，在荧光显微镜下采集的照片。
移植瘤模型体内成瘤率测试 (In Vivo Tumorigenicity Test)
EHSgel可以显著增强肿瘤细胞或组织在原位或皮下移植瘤成瘤效果。本测试实验采用MDA-MB-231三阴性乳腺癌细胞进行皮下移植瘤成瘤率测试。MDA-MB-231细胞单独皮下移植的成瘤率低，但是细胞在混合基质胶注射移植后，可以明显提高该移植瘤的瘤体生长速度和成瘤率。在该检测中，1×106个MDA-MB-231细胞按1:1体积分别与MG，EHSgel 或PBS混合后，注射到BALB/c裸鼠皮下，测试30天内移植瘤的生长速度和成瘤率。测试表明，EHSgel组在成瘤率和生长速度方面，均与MG组相当，且两组均明显高于PBS对照组。（图12. A和C）。实验表明，EHSgel可以支持MDA-MB-231细胞体内成瘤。（图12，B和D）
